Ядро дизайна лаборатории ПЦР:
1, макет лаборатории ПЦР
Лаборатория ПЦР-амплификации в принципе разделена на три отдельные рабочие зоны: зона хранения и подготовки реагентов, зона подготовки образцов, зона амплификации и анализа продуктов амплификации. Чтобы избежать перекрестного загрязнения, вход в каждую рабочую зону должен строго следовать в одном направлении, то есть только из зоны хранения и подготовки реагентов → области подготовки образца → зоны амплификации и анализа продуктов амплификации. Передача реагентов и образцов между каждой экспериментальной зоной должна осуществляться через окно передачи.
2. Разработка лабораторных систем кондиционирования и вентиляции и контроля давления.
Лаборатория ПЦР не имеет строгих требований к уровню очистки, но во избежание возможности перекрестного загрязнения между различными экспериментальными участками рекомендуется принять полную форму поставки и полную организацию вытяжного воздуха. В то же время соотношение притока и отвода воздуха должно строго контролироваться, чтобы обеспечить требования к давлению в каждой экспериментальной зоне.
(1) Зона хранения и подготовки реагентов
Основными операциями в этой экспериментальной области являются приготовление реагентов для хранения, дозирование реагентов и приготовление основной реакционной смеси. Реагенты и материалы, используемые для подготовки проб, следует транспортировать непосредственно в эту зону, а не через другие зоны. Сырье для реагентов должно храниться в этой зоне и готовиться к необходимым реагентам для хранения в этой зоне. Для контроля давления воздушного потока в этой области должно поддерживаться небольшое положительное давление снаружи.
(2) Зона подготовки образца
Основными операциями в этой области являются консервация образцов, извлечение нуклеиновых кислот (РНК, ДНК), хранение и добавление в пробирку для реакции амплификации, а также измерение синтеза ДНК. Градиент давления в этой зоне должен быть положительным по отношению к прилегающей зоне, чтобы избежать попадания аэрозольного загрязнения в зону из соседней зоны. Кроме того, поскольку во время загрузки образцов может произойти загрязнение, вызванное аэрозолями, следует избегать ненужных хождений в этой области.
(3) Область анализа продуктов амплификации и амплификации
Основные операции в этой области - амплификация ДНК и определение амплифицированных фрагментов. Кроме того, добавление подготовленной ДНК-матрицы (из зоны подготовки образца) и приготовление основной реакционной смеси (из зоны хранения и приготовления реагентов) в реакционную смесь также может осуществляться в этой зоне. Требования к градиенту давления в этой области: отрицательное давление относительно прилегающей области, чтобы избежать утечки аэрозоля из этой области. Чтобы избежать загрязнения, вызванного аэрозолями, следует свести к минимуму ненужные прогулки по местности. Отдельные операции, такие как добавление образца, следует выполнять на сверхчистом столе.
3. Предупреждение загрязнения и борьба с ним
Основной вопрос дизайна лаборатории ПЦР - как избежать заражения. В реальной работе распространены следующие виды загрязнений: загрязнение амплифицированной продукции; загрязнение естественной геномной ДНК; загрязнение реагентов и загрязнение между образцами. Поскольку, как только происходит загрязнение, эксперимент должен быть остановлен до тех пор, пока источник загрязнения не будет найден, а результат эксперимента должен быть признан недействительным, а эксперимент необходимо повторить. Таким образом, поиск источника загрязнения вокруг лаборатории после того, как произошло загрязнение, занимает много времени и утомительно, что приводит к потере трудовых и материальных ресурсов. Поэтому во избежание загрязнения первоочередной задачей должно быть предотвращение, а не устранение.
(1) Строгое разделение рабочей зоны
Настройка каждой экспериментальной области разумна; каждая экспериментальная зона должна иметь четкую маркировку (например, привлекательный номер дома или другой цвет земли и т. д.), чтобы избежать путаницы с оборудованием и реагентами в разных экспериментальных зонах.
(2) Разумные системные настройки
Разумные настройки систем кондиционирования и вентиляции, старайтесь использовать комплектные и полностью вытяжные системы кондиционирования; строгий контроль давления воздушного потока для обеспечения различных требований к давлению в различных экспериментальных зонах.
(3) Стандартный режим
Технические специалисты лаборатории тестирования амплификации должны пройти обучение на рабочем месте, и только после получения квалификации они могут быть привлечены к клиническому тестированию амплификации генов; во время экспериментальной операции оператор должен носить перчатки и часто их менять. Кроме того, использование одноразовых колпачков в работе также является эффективной мерой предотвращения загрязнения; уборка проводится своевременно и правильно. После того, как экспериментальные работы закончены, участок необходимо немедленно очистить. В дополнение к обычной дезинфицирующей жидкости для протирания и дезинфекции поверхности или дезинфекции с помощью ультрафиолетового излучения, некоторое экспериментальное оборудование также следует автоклавировать.
(4) Строгое управление
Строго контролируйте вход и выход персонала из лаборатории. Персоналу, не имеющему отношения к эксперименту, не разрешается входить и покидать лабораторию по своему желанию. Если возможно, установите независимые проходы и двери для входа и выхода из всей экспериментальной зоны; свести к минимуму ненужные прогулки в экспериментальной зоне, чтобы уменьшить возможность перекрестного заражения; продукты амплификации Область анализа является основным источником загрязнения амплифицированных продуктов. Отработанную жидкость нельзя сбрасывать в лаборатории. Его необходимо пропитать и продезинфицировать дезинфицирующим средством и выбросить из лаборатории. Одноразовые материалы, такие как использованные наконечники, также следует дезинфицировать. После замачивания и дезинфекции, единообразной обработки, такой как сжигание и т.д .; в области анализа продуктов амплификации могут использоваться некоторые генетические мутации и токсичные вещества, и особое внимание следует уделять безопасности персонала эксперимента.
(5) Полное вспомогательное оборудование лаборатории
Полное лабораторное оборудование необходимо для обеспечения экспериментальной работы. Соответствующее оборудование и инструменты должны быть оборудованы в соответствии с различным экспериментальным содержимым каждой лаборатории, например, сверхчистые столы, центрифуги, пробоотборники и т. Д.